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CPM定量方式是怎樣的

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在edgeR中,提供了一種名為CPM的定量方式,全稱為count-per-millon。
假定原始的表達(dá)量矩陣為count, 計(jì)算CPM的代碼如下

cpm <- apply(count ,2, function(x) { x/sum(x)*1000000 })

原始的表達(dá)量除以該樣本表達(dá)量的總和,在乘以一百萬(wàn)就得到了CPM值 。從公式可以看出, CPM其實(shí)就是相對(duì)豐度,只不過(guò)考慮到測(cè)序的reads總量很多,所以總的reads數(shù)目以百萬(wàn)為單位。

在前面的文章中我們介紹了edgeR提供的TMM歸一化算法,CPM這種求相對(duì)豐度的思想,雖然也是一種比較簡(jiǎn)單的歸一化方式,但它并不用于差異分析之前的歸一化。

在edgeR中,CPM主要有以下兩種用途

1. 過(guò)濾表達(dá)量較低的基因

DESeq2和edgeR都是針對(duì)raw count表達(dá)量進(jìn)行分析,在DESeq2中,在過(guò)濾低表達(dá)量的基因時(shí),直接是根據(jù)reads數(shù)的總和進(jìn)行判斷,代碼如下

countData <- count[apply(count, 1, sum) > 10 , ]

由于不同樣本測(cè)序的reads總數(shù)不同,所以直接將所有樣本的reads相加,然后進(jìn)行過(guò)濾,這種方式略顯粗糙。edgeR中,利用CPM的定量結(jié)果,對(duì)低表達(dá)量的基因進(jìn)行過(guò)濾,代碼如下

countData <- count[apply(cpm(count), 1, sum) > 2 , ]

利用相對(duì)豐度的加和進(jìn)行過(guò)濾,消除了樣本間reads總數(shù)不同的影響。需要注意的是,我們只是用CPM來(lái)過(guò)濾基因,而后續(xù)分析還是基于raw  count的結(jié)果,因?yàn)橹挥衦aw count是基于負(fù)二項(xiàng)分布的。

2. 差異分析的MA圖

MA圖是差異分析常用的可視化手段之一,橫坐標(biāo)為基因在兩組樣本中的均值 , 縱坐標(biāo)為Fold  change, 就是兩組表達(dá)量的倍數(shù)。edgeR中的plotMD函數(shù)可以繪制如下所示的MA圖

CPM定量方式是怎樣的

從x軸的標(biāo)簽可以看出來(lái),采用的是CPM值。由于不同基因CPM值差異很大,所以采用log轉(zhuǎn)換,縮小了不同基因之間的差異。

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網(wǎng)站題目:CPM定量方式是怎樣的
標(biāo)題來(lái)源:http://weahome.cn/article/jescci.html

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